Оценили эффективность препаратов на основе фебантела (Дирофен®, Празицид® - суспензия Плюс и Дронтал® плюс) при экспериментальном лямблиозе собак. Все испытанные средства показали высокую активность против гиардий.
Ключевые слова: гиардии, гиардиоз, собака, фебантел, химиотерапия.
Chemotherapy of dogs lambliosis
S.K. Shibitov, O.V. Petrova, E.B. Bazhibina, A.V. Motskevichus
The efficacy of drugs with active substance febantel (Dirofen®, Prazitsid® -Suspension Plus and Drontal® Plus) was evaluated in experimental lambliosis of dogs. All tested drugs were highly effective.
Key words: giardia, giardiasis, dog, febantel, chemotherapy.
Лямблиоз (син. гиардиоз) – протозойное заболевание животных и человека, вызываемое простейшими – жгутиковыми рода Giardia sp. Впервые этих паразитов описал в конце XVII в. Антони ван Левенгук [11]. Распространены они повсеместно, паразитируют в тонком отделе кишечника.
Ранее специфичность в отношении хозяев служила важнейшим критерием классификации гиардий. Отмечали, что G.intestinalis способна инвазировать человека и свинью, G.duodenalis – кролика, G.canis – собаку, G.cati – кошку, G.equi – лошадь, G.bovis – крупный рогатый скот, G.caprae – козу и овцу [1]. Результаты молекулярно-генетических исследований и изучения особенностей морфологии послужили основой изменения таксономии этих простейших. Выделили G.duodenalis (штамм А), паразитирующую у широкого круга хозяев, в т.ч. человека; G.agilis – у амфибий; G.muris и G.microti – у грызунов; G.ardeae и G.psittaci – у птиц; G.enterica (штамм B) – у человека, собаки, приматов и некоторых других видов диких млекопитающих; G.canis (штамм C/D), – у собак и других псовых; G.cati (штамм F) – у кошек; G.bovis (штамм E) – у крупного рогатого скота и других копытных; G.simondi (штамм G) – у крыс [22].
В связи с продолжающимися уточнениями в таксономии остаются открытыми вопросы эпидемиологии и эпизоотологии лямблиоза. Так, в отечественных учебниках по паразитологии животных сведения о патогенности гиардий для собак отсутствуют, а в зарубежных [12] не связывают инвазию этих простейших с диареей или другими нарушениями функционирования пищеварительной системы этого вида животных, но уточняют, что он может служить источником заражения человека.
В процессе жизненного цикла паразит проходит две стадии развития: трофозоита и цисты. Трофозоит – подвижная форма, обитающая в кишечнике, длиной около 15мкм и шириной 8мкм. Их можно обнаружить в свежих фекалиях собак и кошек с клиническими признаками диареи, но они быстро погибают в окружающей среде. Длина и ширина эллипсовидных цист составляет 12 и 7мкм соответственно. Они устойчивы к факторам внешней среды, благодаря чему сохраняются в условиях высокой влажности и холода несколько месяцев, но плохо переносят высушивание и высокую температуру. Циста является инвазионной стадией гиардий: попадая в питьевую воду или корм, она передается фекально-оральным путем. Минимальная заражающая доза – 10 цист [18]. Под влиянием соляной кислоты и ферментов поджелудочной железы хозяина цисты теряют оболочку. Из них высвобождается по 2 трофозоита, которые созревают и паразитируют в 12-перстной кишке (в ее просвете или прикрепившись к эпителию). Трофозоиты размножаются бинарным делением, а перед выходом из организма покрываются защитной оболочкой, т.е. превращаются в цистную инвазивную форму [5]. Основными механизмами патогенеза лямблиоза считают образование токсинов, индукцию дисбактериоза и местного воспалительного процесса, нарушения процессов переваривания и всасывания питательных веществ через ворсинки кишечника, нарушение его моторики, апоптоз эпителиальных клеток. Как следствие, инвазия проявляется диареей в сочетании с мальабсорбцией [8].
По данным отечественных исследователей, распространенность лямблиоза среди домашних собак в г.Москва варьирует от 6,6 до 18% (у животных моложе 12мес), среди кошек – от 2,48 до 5,6%, у шиншилл достигает 46,1% [2].
Лямблиоз диагностируют комплексно на основании клинической картины заболевания, эпизоотологических данных, результатов микроскопической идентификации трофозоитов или цист в фекалиях. Трофозоиты можно обнаружить в нативных и окрашенных раствором Люголя мазках фекалий, а также после флотации в растворе сульфата цинка. Они имеют характерное строение, которое не меняется под воздействием солевого раствора. Метод быстр в исполнении, дешев, выявляет простейших даже при интенсивности инвазии до 10 цист/г [2]. Его диагностическая ценность выше ряда коммерческих тест-систем ИФА и ПЦР [14]. Кроме того, с его помощью можно оценивать интенсивность инвазии и выявлять другие виды кишечных паразитов. С учетом прерывистого характера выделения цист гиардий во внешнюю среду при получении отрицательных результатов анализов может потребоваться повторное их проведение [10].
Экспериментально доказана возможность передачи гиардий от человека собаке. Выделение цист при лямблиозе обоих хозяев не прекращается в течение6 мес (период наблюдений). Их количество в 1г фекалий варьирует в разные сроки после заражения в значительных пределах – от 0 до 1080000. Таким образом, есть основания считать, что собака может принимать участие в эпидемиологии лямблиоза в качестве дополнительного источника его возбудителя [3].
Начиная с 1990-х гг. предпринимались попытки лечения собак и кошек при гиардиозе на основании экстраполяции результатов решения данной проблемы медицинскими специалистами. В частности установили эффективность применения с этой целью метронидазола [13]. В одной из работ [20] сообщалось о хороших результатах лечения кошек, инвазированных гиардиями, его суспензией, приготовленной на основе рыбьего жира. Однако в ходе клинических испытаний при применении домашним плотоядным метронидазола в дозе выше 50мг/кг массы тела были зарегистрированы нежелательные побочные эффекты: анорексия, рвота, угнетение, неврологические расстройства. Для беременных и кормящих животных препарат оказался непригодным, т.к. он способен проявлять мутагенное и канцерогенное действия, в особенности при длительном применении [9, 15, 19]. Более того, обнаружены метронидазол-резистентные штаммы Giardia spp., что стало причиной для постепенного отказа от назначения метронидазол-содержащих препаратов инвазированным гиардиями собакам и кошкам, хотя в некоторых изданиях до сих пор его причисляют к эффективным средствам лечения при этом паразитозе [14, 23].
Аналогичным образом, при применении альбендазола в дозе 25мг/кг массы тела каждые 12ч в течение 2дней наряду с клинической эффективностью у животных отмечали панцитопению, что указывало на угнетение препаратом гемопоэтической функции костного мозга [16, 17, 21].
Бензимидазолы и пробензимидазолы (альбендазол, метронидазол, мебендазол, фенбендазол, фебантел, клозантел, оксфенбендазол, триклабендазол, оксибендазол) способны нарушать у паразита микротубулярную функцию. Селективная токсичность достигается благодаря тому, что эти препараты в минимальной степени всасываются в кишечнике [17, 23].
В процессе дальнейшего изучения эффективности и механизмов противолямблиозной активности бензимидазолов отмечали, что токсическое действие фенбендазола (фебантела) значительно шире, чем альбендазола и метронидазола. Следовательно, при его передозировке животным риск токсических осложнений значительно ниже. Фенбендазол при пероральном применении в дозе 50 мг/кг массы тела каждые 24ч в течение 3дней оказывает губительное действие на гиардии [23]. Фебантел (от 25 до 35мг/кг массы тела) в сочетании с празиквантелом (от 5 до 7 мг/кг массы тела) и пирантелом (5 – 7 мг/кг массы тела) при назначении по той же схеме эффективны в отношении трофозоитов и цист этих паразитов [6, 7, 16]. В организме животных фебантел метаболизируется в фенбендазол и оксифенбендазол [17].
В соответствии с рекомендациями Ассоциации практикующих ветеринарных врачей США противопаразитарные препараты следует применять при лямблиозе только по клиническим показаниям. Поэтому лечение клинически здоровых животных, инвазированных гиардиями, считают необоснованным, сопряженным с риском появления устойчивых к использованным препаратам форм паразита [6].
Цель работы – в условиях эксперимента оценить эффективность препаратов Дирофен®, Празицид®-суспензия Плюс и Дронтал® плюс, содержащих в качестве действующего вещества фебантел, при лямблиозе собак.
Материалы и методы
Опыты проводили с мая по сентябрь 2018г. на базе ВНИИП – филиал ФНЦ ВИЭВ им. К.И.Скрябина и Я.Р.Коваленко, инновационного ветеринарного центра МГАВМиБ им. К.И.Скрябина и одного из московских приютов для безнадзорных животных.
Цисты гиардий получали от спонтанно зараженных собак и концентрировали методами седиментации. Затем 3 раза в возрастающих дозах (1000, 18000 и 300000 экз.) с интервалом 7дней заражали ими per os 28 беспородных щенков в возрасте от 4 до 8мес массой тела 10 – 15кг. Все животные находились в аналогичных условиях кормления и содержания.
Цисты лямблий выявляли концентрационным методом Фауста (рис. 1 и 2). С этой целью к 1,5 г фекалий добавляли 10мл водопроводной воды. Взвесь тщательно перемешивали и фильтровали через мелкоячеистое сито (марлю). Далее 2мл фильтрата вносили в центрифужную пробирку, доливая до верха воду, и центрифугировали 1 – 3 мин при 2500об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливали, а к осадку добавляли 1мл 33%-ного раствора сульфата цинка. После перемешивания до верха пробирки доливали раствор сульфата цинка. Суспензию центрифугировали 1 – 3мин при 2500об/мин. Металлической петлей снимали несколько капель поверхностного слоя на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и микроскопировали. Раствор сульфата цинка плотностью 1,18 готовили по прописи: сульфат цинка – 371 г, вода – 1л [1, 12].
Интенсивность инвазии щенков оценивали количественным методом обнаружения цист лямблий [4], который модифицировали для удобства подсчета. При помощи электронных весов взвешивали 1г фекалий. Помещали навеску в 10 мл 5%-ного раствора формалина. Взвесь тщательно перемешивали, процеживали через металлическое сито, вновь перемешивали и переносили ее в объеме 0,1 мл пипеточным дозатором на предметное стекло. Образовавшуюся на стекле каплю накрывали покровным стеклом 24×24 мм и микроскопировали при 200-кратном увеличении (окуляр ×10 , объектив ×20) микроскопа ZEISS Axio Imager 2. При таком увеличении микроскопа покровное стекло размером 24×24мм накрывает площадь, соответствующую 2935 полям зрения. Просматривали от 20 до 50 полей зрения и подсчитывали число цист лямблий в каждом из них. Полученные результаты суммировали и делили на число просмотренных полей, получая среднее количество цист в одном поле зрения. При умножении данного показателя на 2935 получали среднее количество цист в 0,1мл взвеси, а на 100 – в 10 мл взвеси с поправкой± 5%. Морфометрию проводили при помощи программного обеспечения ZEISS Axio Imager 2.
Из щенков, инвазированных гиардиями, сформировали три группы. Им перорально давали испытуемые противопаразитарные препараты (ежедневно 3 дня подряд): 5 щенкам первой группы – Дирофен® из расчета 1 таблетка (200мг) на 5кг массы тела, 6 собакам второй группы – Празицид®-суспензию Плюс в дозе 1 мл/3 кг массы тела и 5 щенкам третьей группы – Дронтал® плюс в дозе 1 таблетка/10 кг массы тела (табл. 1). В качестве контроля использовали 2 особей того же возраста с подтвержденной инвазией и 2 свободных от гиардий.
Таблица 1 Дозы (по действующему веществу), в которых противопаразитарные препараты давали щенкам из расчета на 10 кг массы тела
| Препарат | Фебантел, мг | Пирантел памоат (эмбонат), мг | Празиквантел, мг |
| Дирофен | 150 | 150 | 50 |
| Празицид-суспензия Плюс | 150 | 150 | 50 |
| Дронтал плюс | 150 | 144 | 50 |
Полученные результаты, в т.ч. данные лабораторных исследований, регистрировали в индивидуальных анкетах. По окончании лечения из прямой кишки собак собирали пробы фекалий и оценивали интенсэффективность (ИИ) и экстенсэффективность (ЭЭ) использованных препаратов, упомянутыми ранее качественным и количественным методами.
Результаты исследований
У собак после заражения цистами гиардий в некоторых случаях регистрировали диарею. Она возникала при интенсивности инвазии свыше 70000 цист/г фекалий. Кроме того, у животных опытных групп обнаруживали и других эндопаразитов: Toxascarisleonina (в 77,7% случаев), Toxocara canis (5%), Uncinaria stenocephala (10%), Isospora sp. (44,4%) и Neospora caninum (5%).
Установили, что чем выше была заражающая доза, тем больше лямблий прижилось в организме собак. Уровень выделения цист за 3-месячный период наблюдения варьировал у разных особей в широком диапазоне. Например, у одного зараженного контрольного щенка интенсивность инвазии со временем увеличивалась, а у другого снижалась. В некоторых случаях наблюдали спонтанную элиминацию паразита.
Выявили прямую корреляцию тяжести течения экспериментального лямблиоза с интенсинвазированностью животных.
В период лечения и последующие 7дней у щенков каких-либо заметных отклонений от нормы в общем состоянии и поведении не регистрировали. Более того, клиническое состояние некоторых из них заметно улучшилось вследствие прекращения диареи.
При исследовании пулов проб фекалий, проведенных через 2 и 4дня после завершения дачи препаратов, в первой группе цисты лямблий обнаружили у одного щенка (14675 цист/г фекалий), во второй – также у одного (11228 цист/г фекалий) и в третьей – у двух (8893 и 5885 цист/г фекалий). Концентрация цист в 1 г фекалий двух инвазированных контрольных собак составляла 102725 и 29350 (табл.2), а у двух незараженных контрольных особей паразита не обнаружили.
Таблица 2 Результаты лечения опытных собак противопаразитарными препаратами (M±m, при p<0,05)
| Препарат | Идентификационный номер щенка | Концентрация цист в 1 г фекалий | |
|---|---|---|---|
| до лечения | после лечения | ||
| Дирофен® таблетки | 534032; 534812; 534038; 534039; 534037 | 267065,0±73293,11 | 2935,0 |
| Празицид®-суспензия Плюс | 534983; 534609; 534607; 534603; 534988; 534982 | 117890,8±30734,3 | 1881,3 |
| Дронтал® плюс | 531316; 531311; 534716; 534717; 531315 | 271976,6±150267,4 | 2949,6±1869,03 |
| Зараженный контроль | 536435; 536349 | 122402,5±39022,5 | 66037,5±36687,5 |
При применении экспериментально инвазированным гиардиями щенкам Дирофена®, Празицида®-суспензия Плюс и Дронтала® плюс в рекомендуемых производителями дозах ИЭ и ЭЭ этих препаратов составила 80 и 98,9; 83,3 и 98,6; 40 и 98,9% соответственно.
Заключение
Препараты Дирофен®, Празицид®-суспензия Плюс и Дронтал® плюс показали высокую эффективность при гиардиозе собак.
Статья опубликована №8-2019 Журнал «Ветеринария».
- Крылов М.В. Определитель паразитических простейших: человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений. СПб: Зоологический институт, 1996; 604 с.
- Курносова О.П., Одоевская И.М., Красавченко К.С. Определение генотипов Lamblia duodenalis у инвазированных лямблиозом людей в городе Москве. Мед. паразитол. 2015; 3:21 – 24.
- Падченко И.К., Столярчук Н.Г. Собака как спонтанный носитель лямблий и возможный источник лямблиоза в природе. Вестник зоологии. 1970; 3:55 – 60.
- МУК 4. 21174 – 02. Использование модельных тестов цист лямблий и ооцист криптоспоридий для гигиенической оценки эффективности водоочистки. Экологический вестник России. 2004; 1:55 – 60.
- Ankarklev J., Jerlstrom-Hultqvist J., Ringqvist E. et al. Behind the smile. cell biology and disease mechanisms of Giardia species. Nat Rev Microbiol. 2010; 8:413 – 422.
- Barr S.C., Bowman D.D., Frongillo M.F. et al. Efficacy of a drug combination of praziquantel, pyrantel pamoate, and febantel against giardiasis in dogs. Am J. Vet. Res. 1998; 59:1134 – 1136.
- Barutzki D., Schimmel A., Schaper R. Efficacy of pyrantel embonate, febantel and praziquantel against Giardia spp. in naturally infected dogs. In. Oslon B.E., Olson M.E., Wallis P.M. Giardia-the cosmopolitan parasite. CABI Publishing, Wallingford, UK. 2002; 177 – 180.
- Buret A.G. Pathophysiology of enteric infections with Giardia duodenalius. Parasite. 2008; 15:261 – 265.
- Caylor K.B., Cassimatis M.K. Metronidazole neurotoxicosis in two cats. J. Am Anim Hosp Assoc. 2001; 37:258 – 262.
- Decock C., Cadiergues M.C., Larcher M. et al. Comparison of two techniques for diagnosis of giardiasis in dogs. Parasite. 2003; 10(1):69 – 72.
- Dobell C. The discovery of the intestinal protozoa of man. Proc. R. Soc. Med. 1920; 13:1 – 15.
- Foreyt W.J. Veterinary parasitology reference manual. John Wiley & Sons, 2013.
- Kirkpatrick C.E. Giardiasis. Vet. Clin. N Am. Sm Anim Pract. 1987; 17:1377 – 1387.
- Leib M.S., Zajac A.M. Giardiasis in dogs and cats. Vet. Med. 1999; 94:793 – 802.
- Meyer E.K. Adverse events associated with albendazole and other products used for the treatment of giardiasis in dogs. J. Am Vet. Med. Assoc. 2001; 213:44 – 46.
- Montoya A., Dado D., Mateo M. et al. Efficacy of Drontal® flavour Plus (50 mg praziquantel, 144 mg pyrantel embonate, 150 mg febantel per tablet) against Giardia sp. in naturally infected dogs. Parasitol. Res. 2008; 103:1141 – 1144.
- Plumb D.C. Veterinary drug handbook. 3rd ed. Ames, Iowa. Iowa State Univ. Press. 1999; 11:268.
- Rendtorff R.C. The experimental transmission of human intestinal protozoan parasites. II. Giardia lamblia cysts given in capsules. Am. J. Hyg. 1954; 59:209 – 220.
- Rosado T.W., Specht A., Marks S.L. Neurotoxicosis in 4 cats receiving ronidazole. J. Vet. Intern Med. 2007; 21:328 – 331.
- Scorza A.V., Lappin M.R. Metronidazole for the treatment of feline giardiasis. J. Feline Med. Surg. 2004; 6:157 – 160.
- Stokol T., Randolf J.F., Nachbar S. et al. Development of bone marrow toxicosis after albendazole administration in a dog and cat. JAVMA. 1997; 210:1753 – 1756.
- Thompson R.C.A., Monis P.T. Taxonomy of Giardia species. Giardia. Springer, Vienna, 2011; 3 – 15.
- Zajac A.M., Labranche T.P., Donoghue A.R., Chu T.C. Efficacy of fenbendazole in the treatment of experimental Giardia infection in dogs. Am J. Vet. Res. 1998; 59:61 – 63.
