Химиотерапия собак при лямблиозе

237-2018

УДК 619:616.993.1:636.7

ХИМИОТЕРАПИЯ собак ПРИ ЛЯМБЛИОЗЕ

Самат Карабаевич Шибитов, к.в.н., ведущий научный сотрудник Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений – филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (г. Москва), samshib@ya.ru

Ольга Владиславовна Петрова,  к.в.н., ООО «Апиценна» (Московская область, г. Балашиха), info@apicenna.ru

Елена Борисовна Бажибина, к.в.н., 

Андрюс Моцкевичус, ветеринарный врач, Инновационный ветеринарный центр Московской ветеринарной академии имени К.И. Скрябина (г. Москва), alena_centr@bk.ru

Оценили эффективность препаратов на основе фебантела (Дирофен^®, Празицид^® - суспензия Плюс и Дронтал^® плюс) при экспериментальном лямблиозе собак. Все испытанные средства показали высокую активность против гиардий. Ключевые слова: гиардии, гиардиоз, собака, фебантел, химиотерапия.

Chemotherapy of dogs lambliosis

S.K. Shibitov, O.V. Petrova, E.B. Bazhibina, A.V. Motskevichus

The efficacy of drugs with active substance febantel (Dirofen^®, Prazitsid^® -Suspension Plus and Drontal^® Plus) was evaluated in experimental lambliosis of dogs. All tested drugs were highly effective. Key words: giardia, giardiasis, dog, febantel, chemotherapy.

Лямблиоз (син. гиардиоз) – протозойное заболевание животных и человека, вызываемое простейшими – жгутиковыми  рода Giardia sp.  Впервые этих паразитов описал в конце XVII в. Антони ван Левенгук  [11]. Распространены они  повсеместно, паразитируют в тонком отделе кишечника.

Ранее специфичность в отношении хозяев служила важнейшим критерием классификации гиардий. Отмечали, что G. intestinalis способна инвазировать человека и свинью, G. duodenalis – кролика, G. canis – собаку, G. cati – кошку, G. equi – лошадь, G. bovis – крупный рогатый скот, G. caprae – козу и овцу [1]. Результаты молекулярно-генетических исследований и изучения особенностей морфологии послужили основой изменения таксономии этих простейших. Выделили G. duodenalis (штамм А), паразитирующую  у широкого круга хозяев, в т.ч. человека; G. agilis – у амфибий; G. muris и G. microti – у грызунов; G. ardeae и G. psittaci –  у птиц; G. enterica (штамм B) –  у человека, собаки, приматов и некоторых других видов диких млекопитающих; G. canis (штамм C/D), – у  собак и других псовых; G. cati (штамм F) – у  кошек; G. bovis (штамм E) –  у крупного рогатого скота и других копытных; G. simondi (штамм G) – у крыс [22].

В связи с продолжающимися уточнениями в таксономии остаются открытыми вопросы эпидемиологии и эпизоотологии лямблиоза. Так,  в отечественных учебниках по паразитологии животных сведения о патогенности гиардий для собак отсутствуют, а в зарубежных [12] не связывают инвазию этих простейших с диареей или другими нарушениями функционирования пищеварительной системы этого вида животных, но уточняют, что он может служить источником заражения человека.

В процессе жизненного цикла паразит проходит две стадии развития: трофозоита и цисты. Трофозоит – подвижная форма, обитающая в кишечнике, длиной около 15 мкм и шириной 8 мкм. Их можно обнаружить в свежих фекалиях собак и кошек с клиническими признаками диареи, но они быстро погибают в окружающей среде. Длина и ширина эллипсовидных цист составляет 12 и 7 мкм соответственно. Они устойчивы к факторам внешней среды, благодаря чему сохраняются в условиях высокой влажности и холода несколько месяцев, но плохо переносят высушивание и высокую температуру. Циста является инвазионной стадией гиардий: попадая в питьевую воду или корм, она передается фекально-оральным путем. Минимальная заражающая доза – 10 цист [18]. Под влиянием соляной кислоты и ферментов поджелудочной железы хозяина цисты теряют оболочку. Из них высвобождается по 2 трофозоита, которые созревают и паразитируют в 12-перстной кишке (в ее просвете или прикрепившись к эпителию). Трофозоиты размножаются бинарным делением, а перед выходом из организма покрываются защитной оболочкой, т.е. превращаются в цистную инвазивную форму [5]. Основными механизмами патогенеза лямблиоза считают образование токсинов, индукцию дисбактериоза и местного воспалительного процесса, нарушения процессов переваривания и всасывания питательных веществ через ворсинки кишечника, нарушение его моторики, апоптоз эпителиальных клеток. Как следствие, инвазия проявляется диареей в сочетании с мальабсорбцией [8].

По данным отечественных исследователей, распространенность лямблиоза среди домашних собак в г. Москва варьирует от 6,6 до 18 % (у животных моложе 12 мес), среди кошек – от 2,48 до 5,6 %, у шиншилл достигает 46,1 % [2].

Лямблиоз диагностируют комплексно на основании клинической картины заболевания, эпизоотологических данных, результатов микроскопической идентификации трофозоитов или цист в фекалиях. Трофозоиты можно обнаружить в нативных и окрашенных раствором Люголя мазках фекалий, а также после флотации в растворе сульфата цинка. Они имеют характерное строение, которое не меняется под воздействием солевого раствора. Метод быстр в исполнении, дешев, выявляет простейших даже при интенсивности инвазии до 10 цист/г [2]. Его диагностическая ценность выше ряда коммерческих тест-систем ИФА и ПЦР [14]. Кроме того, с его помощью можно оценивать интенсивность инвазии и выявлять другие виды кишечных паразитов. С учетом прерывистого характера выделения цист гиардий во внешнюю среду при получении отрицательных результатов анализов может потребоваться повторное их проведение [10].

Экспериментально доказана возможность передачи гиардий от человека собаке. Выделение цист при лямблиозе обоих хозяев не прекращается в течение 6 мес (период наблюдений). Их количество в 1 г фекалий варьирует в разные сроки после заражения в значительных пределах – от 0 до 1 080 000. Таким образом, есть основания считать, что собака может принимать участие в эпидемиологии лямблиоза в качестве дополнительного источника его возбудителя [3].

Начиная с 1990-х гг. предпринимались попытки лечения собак и кошек при гиардиозе на основании экстраполяции результатов решения данной проблемы медицинскими специалистами. В частности установили эффективность применения с этой целью метронидазола [13]. В одной из работ [20] сообщалось о хороших результатах лечения кошек, инвазированных гиардиями, его суспензией, приготовленной на основе рыбьего жира. Однако в ходе клинических испытаний при применении домашним плотоядным метронидазола в дозе выше 50 мг/кг массы тела были зарегистрированы нежелательные побочные эффекты: анорексия, рвота, угнетение, неврологические расстройства. Для беременных и кормящих животных препарат оказался непригодным, т.к. он способен проявлять мутагенное и канцерогенное действия, в особенности при длительном применении [9, 15, 19]. Более того, обнаружены метронидазол-резистентные штаммы Giardia spp., что стало причиной для постепенного отказа от назначения метронидазол-содержащих препаратов инвазированным гиардиями собакам и кошкам, хотя в некоторых изданиях до сих пор его причисляют к эффективным средствам лечения при  этом  паразитозе [14, 23].

Аналогичным образом, при применении альбендазола в дозе 25 мг/кг массы тела каждые 12 ч в течение 2 дней наряду с клинической эффективностью у животных отмечали панцитопению, что указывало на угнетение препаратом гемопоэтической функции костного мозга [16, 17, 21].

Бензимидазолы и пробензимидазолы (альбендазол, метронидазол, мебендазол, фенбендазол, фебантел, клозантел, оксфенбендазол, триклабендазол, оксибендазол) способны нарушать у паразита микротубулярную функцию. Селективная токсичность достигается благодаря тому, что эти препараты в минимальной степени всасываются в кишечнике [17, 23].

В процессе дальнейшего изучения эффективности и механизмов противолямблиозной активности бензимидазолов отмечали, что токсическое действие фенбендазола (фебантела) значительно шире, чем альбендазола и метронидазола. Следовательно, при его передозировке животным риск токсических осложнений значительно ниже. Фенбендазол при пероральном применении в дозе 50 мг/кг массы тела каждые 24 ч в течение 3 дней оказывает губительное действие на гиардии [23]. Фебантел (от 25 до 35 мг/кг массы тела) в сочетании с  празиквантелом (от 5 до 7 мг/кг массы тела) и пирантелом (5 – 7 мг/кг массы тела) при назначении по той же схеме эффективны в отношении трофозоитов и цист этих паразитов [6, 7, 16]. В организме животных фебантел метаболизируется в фенбендазол и оксифенбендазол [17].

В соответствии с рекомендациями Ассоциации практикующих ветеринарных врачей США противопаразитарные препараты следует применять при  лямблиозе только по клиническим показаниям. Поэтому лечение клинически здоровых животных,  инвазированных гиардиями, считают необоснованным, сопряженным с риском появления устойчивых к использованным препаратам форм паразита [6].

Цель работы – в условиях эксперимента оценить эффективность препаратов Дирофен^®, Празицид^®-суспензия Плюс и Дронтал^® плюс, содержащих в качестве действующего вещества фебантел, при лямблиозе собак.

Материалы и методы.

Опыты проводили с мая по сентябрь 2018 г. на базе ВНИИП – филиал ФНЦ ВИЭВ им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко, инновационного ветеринарного центра МГАВМиБ им. К.И. Скрябина и одного из московских приютов для безнадзорных животных.

Цисты гиардий получали от спонтанно зараженных собак и концентрировали методами седиментации. Затем 3 раза в возрастающих дозах (1000, 18000 и 300000 экз.) с интервалом  7 дней заражали ими per os 28 беспородных щенков в возрасте от 4 до 8 мес  массой тела 10 – 15 кг. Все животные находились в аналогичных условиях кормления и содержания.

Цисты лямблий выявляли концентрационным методом Фауста (рис. 1 и 2). С этой целью к 1,5 г фекалий добавляли 10 мл водопроводной воды. Взвесь тщательно перемешивали и фильтровали через мелкоячеистое сито (марлю). Далее  2 мл фильтрата вносили в центрифужную пробирку, доливая до  верха воду, и центрифугировали 1 – 3 мин при 2500 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливали, а к осадку добавляли 1 мл 33%-ного раствора сульфата цинка. После перемешивания до верха пробирки доливали раствор сульфата цинка. Суспензию центрифугировали 1 – 3 мин при 2500 об/мин. Металлической петлей снимали несколько капель поверхностного слоя на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и микроскопировали. Раствор сульфата цинка плотностью 1,18 готовили по прописи: сульфат цинка – 371 г, вода – 1 л [1, 12].

Интенсивность инвазии щенков оценивали количественным методом обнаружения цист лямблий [4], который  модифицировали для удобства подсчета. При помощи электронных весов взвешивали 1 г фекалий. Помещали навеску в 10 мл 5%-ного раствора формалина. Взвесь тщательно перемешивали, процеживали через металлическое сито, вновь перемешивали и переносили ее в объеме 0,1 мл пипеточным дозатором на предметное стекло. Образовавшуюся на стекле каплю накрывали покровным стеклом 24×24 мм и микроскопировали при 200-кратном увеличении (окуляр ×10 , объектив ×20) микроскопа ZEISS Axio Imager 2. При таком увеличении микроскопа покровное стекло размером 24×24 мм накрывает площадь, соответствующую 2935 полям зрения. Просматривали от 20 до 50 полей зрения и подсчитывали число цист лямблий в каждом из них. Полученные результаты суммировали и делили на число просмотренных полей, получая среднее количество цист в одном поле зрения. При умножении данного показателя   на 2935 получали среднее количество цист в 0,1 мл взвеси, а  на 100 –  в 10 мл взвеси с поправкой ± 5 %. Морфометрию проводили при помощи программного обеспечения ZEISS Axio Imager 2.

Из щенков, инвазированных гиардиями, сформировали три группы. Им  перорально давали испытуемые противопаразитарные препараты (ежедневно 3 дня подряд): 5 щенкам первой  группы  – Дирофен^® из расчета  1 таблетка (200 мг) на 5 кг массы тела, 6 собакам второй группы  – Празицид^®-суспензию Плюс в дозе 1 мл/3 кг массы тела и 5 щенкам третьей  группы – Дронтал^® плюс в дозе 1 таблетка/10 кг массы тела (табл. 1). В качестве контроля использовали 2 особей того же возраста с  подтвержденной инвазией  и 2 свободных от гиардий.

Таблица 1

Дозы (по действующему веществу), в которых противопаразитарные препараты давали щенкам из расчета на 10 кг массы тела

Полученные результаты, в т.ч. данные лабораторных исследований, регистрировали в индивидуальных анкетах. По окончании лечения из прямой кишки собак собирали пробы фекалий и оценивали интенсэффективность (ИИ) и экстенсэффективность (ЭЭ) использованных препаратов, упомянутыми ранее качественным и количественным методами.

Результаты исследований.

У собак после заражения цистами гиардий в некоторых случаях регистрировали диарею. Она возникала при  интенсивности инвазии свыше 70 000 цист/г фекалий. Кроме того,  у животных  опытных групп обнаруживали и других эндопаразитов: Toxascaris leonina (в 77,7 % случаев), Toxocara canis (5 %), Uncinaria stenocephala (10 %), Isospora sp. (44,4 %) и Neospora caninum (5 %).

Установили, что чем выше была заражающая доза, тем больше лямблий прижилось в организме собак. Уровень выделения цист за 3-месячный период наблюдения варьировал у разных особей в широком диапазоне. Например, у одного зараженного контрольного щенка интенсивность инвазии со временем увеличивалась, а у другого снижалась. В некоторых случаях наблюдали спонтанную элиминацию паразита.

Выявили прямую корреляцию тяжести течения экспериментального лямблиоза с интенсинвазированностью животных.

В период лечения и последующие 7 дней у щенков каких-либо  заметных отклонений от нормы в общем состоянии и поведении не регистрировали. Более того, клиническое состояние некоторых из них заметно улучшилось вследствие прекращения диареи.

При исследовании пулов проб фекалий, проведенных через 2 и 4 дня после завершения дачи  препаратов, в первой группе цисты лямблий обнаружили у одного щенка (14675 цист/г фекалий), во второй – также у одного (11228 цист/г фекалий) и в третьей – у двух (8893 и 5885 цист/г фекалий). Концентрация цист в 1 г фекалий двух инвазированных контрольных собак составляла 102725 и 29350 (табл. 2), а у двух  незараженных контрольных особей паразита не обнаружили.

Таблица 2

Результаты лечения опытных собак противопаразитарными препаратами (M±m, при p<0,05)

При применении экспериментально  инвазированным  гиардиями щенкам Дирофена^®, Празицида^®-суспензия Плюс и Дронтала^® плюс в рекомендуемых  производителями дозах ИЭ и ЭЭ этих препаратов составила 80 и 98,9; 83,3 и 98,6; 40 и 98,9 % соответственно.

Заключение.

Препараты Дирофен^®, Празицид^®-суспензия Плюс и Дронтал^® плюс показали высокую эффективность при гиардиозе собак.

Литература

1. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших: человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений. СПб: Зоологический институт, 1996; 604 с.
2. Курносова О.П., Одоевская И.М., Красавченко К.С. Определение генотипов Lamblia duodenalis у инвазированных лямблиозом людей в городе Москве. Мед. паразитол. 2015; 3:21 – 24.
3. Падченко И.К., Столярчук Н.Г. Собака как спонтанный носитель лямблий и возможный источник лямблиоза в природе. Вестник зоологии. 1970;  3:55 – 60.
4. МУК 4. 21174 – 02. Использование модельных тестов цист лямблий и ооцист криптоспоридий для гигиенической оценки эффективности водоочистки. Экологический вестник России. 2004;  1:55 – 60.
5. Ankarklev J., Jerlstrom-Hultqvist J., Ringqvist E. et al. Behind the smile.  cell biology and disease mechanisms of Giardia species. Nat Rev Microbiol. 2010; 8:413 – 422.
6. Barr S.C., Bowman D.D., Frongillo M.F. et al. Efficacy of a drug combination of praziquantel, pyrantel pamoate, and febantel against giardiasis in dogs. Am J. Vet. Res. 1998; 59:1134 – 1136.
7. Barutzki D., Schimmel A., Schaper R. Efficacy of pyrantel embonate, febantel and praziquantel against Giardia spp. in naturally infected dogs. In.  Oslon B.E., Olson M.E., Wallis P.M. Giardia-the cosmopolitan parasite. CABI Publishing, Wallingford, UK. 2002; 177 – 180.
8. Buret A.G. Pathophysiology of enteric infections with Giardia duodenalius. Parasite. 2008; 15:261 – 265.
9. Caylor K.B., Cassimatis M.K. Metronidazole neurotoxicosis in two cats. J. Am Anim Hosp Assoc. 2001; 37:258 – 262.
10.  Decock C., Cadiergues M.C., Larcher M. et al. Comparison of two techniques for diagnosis of giardiasis in dogs. Parasite. 2003; 10(1):69 – 72.
11.  Dobell C. The discovery of the intestinal protozoa of man. Proc. R. Soc. Med. 1920; 13:1 – 15.
12.  Foreyt W.J. Veterinary parasitology reference manual. John Wiley & Sons, 2013.
13.  Kirkpatrick C.E. Giardiasis. Vet. Clin. N Am. Sm Anim Pract. 1987; 17:1377 – 1387.
14.  Leib M.S., Zajac A.M. Giardiasis in dogs and cats. Vet. Med. 1999; 94:793 – 802.
15.  Meyer E.K. Adverse events associated with albendazole and other products used for the treatment of giardiasis in dogs. J. Am Vet. Med. Assoc. 2001; 213:44 – 46.
16.  Montoya A., Dado D., Mateo M. et al. Efficacy of Drontal^® flavour Plus (50 mg praziquantel, 144 mg pyrantel embonate, 150 mg febantel per tablet) against Giardia sp. in naturally infected dogs. Parasitol. Res. 2008; 103:1141 – 1144.
17.  Plumb D.C. Veterinary drug handbook. 3rd ed. Ames, Iowa. Iowa State Univ. Press. 1999; 11:268.
18.  Rendtorff R.C. The experimental transmission of human intestinal protozoan parasites. II. Giardia lamblia cysts given in capsules. Am. J. Hyg. 1954; 59:209 – 220.
19.  Rosado T.W., Specht A., Marks S.L. Neurotoxicosis in 4 cats receiving ronidazole. J. Vet. Intern Med. 2007; 21:328 – 331.
20.  Scorza A.V., Lappin M.R. Metronidazole for the treatment of feline giardiasis. J. Feline Med. Surg. 2004; 6:157 – 160.
21.  Stokol T., Randolf J.F., Nachbar S. et al. Development of bone marrow toxicosis after albendazole administration in a dog and cat. JAVMA. 1997; 210:1753 – 1756.
22. Thompson R.C.A., Monis P.T. Taxonomy of Giardia species. Giardia. Springer, Vienna, 2011; 3 – 15.
23.  Zajac A.M., Labranche T.P., Donoghue A.R., Chu T.C. Efficacy of fenbendazole in the treatment of experimental Giardia infection in dogs. Am J. Vet. Res. 1998; 59:61 – 63.

Статья опубликована №8-2019 Журнал «Ветеринария».