Опыт применения препарата Пиро-стоп® для борьбы с анаплазмозом крупного рогатого скота

УДК 619.636.03.576.893.192.6

Опыт применения препарата Пиро-стоп^® для борьбы с анаплазмозом крупного рогатого скота

Тарасов И.Е., Канапелько Е.Н.

1. Тарасов И.Е., кандидат биологических наук, сотрудник ФГБНУ «ВНИИВСГЭ, электронная почта: i_tarasov1984@mail.ru, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д. 5, 8 (499) 256-35-81; 2. Канапелько Е.Н., ветеринарный врач, ветеринарная клиника «МиГ» 8 (495) 181-30-94, электронная почта: talalaka_ne@mail.ru, 129226, г. Москва, ул. Сельскохозяйственная, д. 16а, стр. 3

Резюме: анаплазмоз регистрируется во многих субъектах Российской Федерации, а также в других странах мира. По данным литературы заболевание регистрируется в форме острого течения, включая ассоциативную форму, а также в форме носительства. Для борьбы с анаплазмозом у крупного рогатого скота был испытан имидокарб дипропионат 12% (препарат Пиро-стоп^®) в условиях СПХ «Новый путь» Нижегородской области. При визуальном осмотре у 11 коров не были обнаружены клинические признаки острого анаплазмоза. Проведена оценка морфологических и биохимических показателей крови: у отдельных особей выявлены умеренная эритропения и гемоглобинемия в сочетании с абсолютным и относительным лейко- и моноцитозом, что указывает на затухание инфекционного процесса. Микроскопия окрашенных мазков крови выявила наличие анаплазм при уровне паразитемии 1,45± 0,64%, для подтверждения диагноза использовалась комбинация серологических методов РНГА и ИФА, по результатам которых все 11 коров были серопозитивны в разведении 1:50…1:400. Кроме зараженного контроля (n=2) всех животных подвергли лечению препаратом Пиро-стоп^® в разных дозах: опытную группу 1 (n=4) из расчета по действующему веществу 300 мг имидокарба дипропионата на 100 кг веса однократно и опытную группу 2 (n=5) – 480 мг имидикарба дипропионата на 100 кг веса двукратно с интервалом 14 дней. Через 30 дней уровень паразитемии в опытной группе 1 снизился до 0,90±0,33% (на 37,93%) против 0,09± 0,11% (на 93,79%) во второй опытной группе, что согласуется и с результатами РНГА и ИФА. Наиболее чувствительным методом диагностики анаплазмоза в форме носительства являются методы РНГА и ИФА. Для устранения носительства у животных эффективной является доза препарата 4 мл или (480 мг имидикарба дипропионата) на 100 кг веса при двукратном применении.

Ключевые слова: анаплазмоз, крупный рогатый скот, носительство, имидокарб дипропионат, паразитемия, лабораторная диагностика.

Введение. За последние десятилетия заметно расширился ареал анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота. Заболевание встречается в различных субъектах Российской Федерации. За Уралом, в условиях резко-континентального климата в Омской области по данным исследователей до 92% случаев заболевания и носительства, при инфицированности коров и телят от 20 до 90%. Выявлено, что в 10 - 50% случаев анаплазмоз у крупного рогатого скота имеет ассоциативную форму течения в более тяжёлой форме. При этом у взрослого поголовья крупного рогатого скота число сочленов ассоциации достигало до трёх, а у молодняка - до пяти, в сочетаниях с хламидиозом, лептоспирозом, а у молодняка ещё и с диплококкозом, инфекционным ринотрахеитом, парагриппом, листериозом и наиболее часто в комплекте с сальмонеллёзом [2,10,11]. В условиях хозяйств Новосибирской, Свердловской области и Алтайского края клиническое проявление анаплазмоза регистрировали преимущественно в острой форме, а в хозяйствах Амурской, Кемеровской области, Красноярского, Ставропольского края - в виде носительства [10,11,13]. Традиционно неблагополучными по анаплазмозу остаются Брянская, Калужская, Рязанская, Калининградская, Саратовская, Тюменская, Владимирская, Нижегородская, Новосибирская, Ульяновская области и Алтайский край. Анаплазмоз регистрируется также во многих странах мира, в частности странах Балтии, Средней Азии, Латинской Америки [1,2,4,14-17]. Основной ущерб в результате заражения поголовья анаплазмозом складывается из: снижения продуктивности животных, абортирования самок во второй половине стельности [3,8,12,13], снижения молочной продуктивности на 80% и более вплоть до прекращения лактации, при этом функции молочных желез после переболевания полностью не восстанавливалась у животных [12].

Основным местом локализации анаплазм являются эритроциты, иногда их находят в лейкоцитах и тромбоцитах. Пораженность эритроцитов может составлять от 3 до 40%, а иногда до 80%. В одном эритроците может быть в среднем от 1 до 4 возбудителей [7,18]. Так как существует вариабельность путей передачи возбудителя, включая основной путь – через клеща-переносчика заболевание продолжает распространятся по всему миру.

В связи с вышеизложенным, одним из ключевых моментов эффективной терапии анаплазмоза является: осуществление контроля за численностью клещей и кровососущих насекомых-переносчиков, а также уничтожение самих анаплазм.

За последнее 10-летие наукой и практикой был накоплен опыт и разработаны рекомендации по сокращению очагов анаплазмоза, по эффективной диагностике заболевания. Среди достоверных методов диагностики в сочетании с затратами на исследование можно выделить РНГА и ИФА [4,5-7,9].

Целью нашего исследования было определить эффективность имидокарба дипропионата 12% в отношении возбудителя анаплазмоза у крупного рогатого скота в производственных условиях.

Материалы и методы. Опыт проводили в условиях СПХ «Новый путь» Нижегородской области в период с апреля по май в 2016 году. Для формирования опытных групп в хозяйстве провели обследование у 80 голов крупного рогатого скота разных возрастных групп в рамках ежегодного мониторинга. На основании клинических признаков: анемия, истощение, а также по результатам гематологических и серологических исследований было сформировано 3 группы: опытная группа 1 (n=4), опытная группа 2 (n=5) и контрольная группа (n=2). Для проведения микроскопии мазков крови животных на определение лейкоцитарной формулы и наличия возбудителя анаплазмоза кровь брали из краевой вены уха. Препарат окрашивали по Романовскому-Гимза, интенсивность паразитемии определяли количеством паразитов в 100 полях зрения (п./з.) микроскопа, в %. Для серологической диагностики анаплазмоза использовали комбинацию методов РНГА и ИФА в соответствии с Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике анаплазмоза рогатого скота» [6] с этой целью проводили забор крови из яремной вены животных, а пробы в запечатанном виде с описью направляли в лабораторию протозоозов ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко. Гематологические исследования и биохимические исследования крови проводили в соответствии с МУК и СТП независимой лаборатории Шанс-Био, г. Москва.

В качестве препарата для борьбы с анаплазмозом был использован Пиро-стоп^® (производства ООО НПО «Апи-Сан»), содержащий имидокарб дипропионат в форме 12% раствора для инъекций. Опытная группа 1 животных получала препарат в дозе 300 мг имидокарба дипропионата на 100 кг массы тела однократно и опытная группа 2 – в дозе 480 мг имидокарба дипропионата на 100 кг массы тела внутримышечно в область крупа двукратно с интервалом 14 дней.

На 30 день исследования проводили повторный серологический тест и микроскопию мазков крови для подтверждения эффективности препарата. За животными вели наблюдение с регистрацией нежелательных реакций. Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью простого сравнения средних по двустороннему t-критерию Стъюдента. Различия определяли при 0,05 уровне значимости. Статистический анализ выполняли с помощью программы «Student-200».

Результаты исследования. Нижегородская область является неблагополучной по анаплазмозу крупного рогатого скота, в рамках проведения мониторинга в хозяйстве регулярно производится лабораторный скрининг. Для оценки физиологического статуса животных и выявления скрытой анемии перед лечением у животных произвели отбор проб крови для проведения гематологических исследований. Результаты исследований проб крови коров представлены в таблице 1.

1. Морфологические показатели крови коров (М±m)

Результаты биохимического скрининга представлены в таблице 2.

2. Биохимические показатели крови коров (М±m)

При визуальном осмотре признаков острого течения анаплазмоза отмечено не было: вялость, гипертермия, иктеричность слизистых оболочек. На основании анализа данных морфологических и биохимических показателей крови животных у отдельных особей отмечали умеренную эритропению и гемоглобинемию, а также признаки нарушения функций печени (превышение показателя АСТ). Абсолютный и относительный лейкоцитоз и умеренный моноцитоз указывает на присоединение инфекционного процесса в стадии завершения (после переболевания). При повторном скрининге через 30 дней после лечения в опытных группах морфологические и биохимические параметры крови находились в пределах физиологической нормы.

При микроскопии окрашенных мазков крови 11 коров был установлен уровень паразитемии 1,45± 0,64% в 100 полях зрения. При повторном исследовании после лечения через 30 дней животных в двух опытных группах уровень паразитемии составил соответственно у животных в опытной группе 1 до 0,90±0,33% (на 37,93%) в 100 полях зрения и во второй опытной группе - 0,09± 0,11% (на 93,79%) в 100 полях зрения. Уровень паразитемии в группе контроля спустя 30 дней существенно не изменился.

По результатам серологических исследований (РНГА, ИФА) диагноз анаплазмоз был подтвержден в разведении антигена 1:50…1:400. При этом при микроскопии окрашенных мазков анаплазмы были обнаружены лишь у 8 коров, при использовании серологических методов диагностики анаплазмоз был подтвержден у всех животных.

После лечения животных во второй опытной группе при повторном серологическом контроле все животные были свободны от паразитов. Результаты серологических исследований представлены в таблице 3.

3. Результаты исследования сыворотки крови коров методом ИФА, РНГА (качественный учет реакции)

По результатам исследования, у всех 11 коров диагностировали анаплазмоз. Отсутствие клинически выраженных признаков, характерных для кровепаразитарных заболеваний позволяет говорить о субклинической форме инвазии или носительстве, однако на основании данных морфологического анализа крови у 1-2 особей все же можно диагностировать анаплазмоз в легкой степени.

Несмотря на то, что микроскопия окрашенных мазков является рутинным и простым методом диагностики анаплазмоза, в случае носительства более предпочтительно использовать серологические методы (РНГА, ИФА), дающие более высокую точность определения.

В случае носительства высокую эффективность в отношении анаплазм показал препарат Пиро-стоп^®, содержащий 12% имидокарба дипропионата после двукратного применения в дозе 4 мл на 100 кг веса животного. В тоже время доза 2,5 мл на 100 кг веса для устранения состояния носительства оказалась малоэффективной, хотя снижение паразитемии наблюдалось и в этой группе животных. После применения препарата нежелательных реакций отмечено не было.

Таким образом, препарат Пиро-стоп^®, содержащий в качестве действующего вещества имидокарб дипропионат, может рекомендоваться для устранения анаплазмоза в форме носительства у крупного рогатого скота. Для диагностики заболевания наряду с методом микроскопии в случае носительства более предпочтительны методы РНГА или ИФА.

Литература

1. Агаев, A.A. Анаплазмоз крупного рогатого скота и меры борьбы с ним в Азербайджанской ССР: автореф. дис….д-ра.вет.наук /А.А. Агаев. – Москва, 1971.- 43 с.
2. Бейсембаев, К.К. Эпизоотологические особенности анаплазмоза крупного рогатого скота и совершенствование методов его диагностики, профилактики и лечения: дис….канд. вет. наук/ К.К. Бейсембаев.- Омск, 2005. – 140 л.
3. Битюков, П.А. О терапевтической эффективности террамицина при анаплазмозе крупного рогатого скота /П.А. Битюков, П.М. Мордасов // Матер. науч. конф. по проблемам протозоологии. - Самарканд Тайляк, 1963. – С. 28 - 29.
4. Василевич Ф. И., Белименко В. В., Гулюкин М. И., Георгиу Х. Практическое руководство по борьбе с кровепаразитарными болезнями домашних животных. – Москва: ЗооВетКнига, 2015. – 86 с.
5. Георгиу, X., Серологические реакции для диагностики анаплазмоза /X. Георгиу, Н.И. Степанова // Ветеринария.- 1987.- № 5.-С. 43-45.
6. Георгиу, X. Сравнительная оценка серологических тестов (РДСК, РИГА и ИФА) для диагностики анаплазмоза рогатого скота и нутталлиоза лошадей: дис….д-ра биол. наук / X. Георгиу.  – М., 1997. – 203 л.
7. Георгиу, Х. Современные лабораторные методы диагностики анаплазмоза крупного рогатого скота и овец / Х. Георгиу, В.В. Белименко // РВЖ. СХЖ. – 2014. – № 3. – С. 31–32.
8. Гробов, О.Ф. Экспериментальные исследования по выяснению возможного круга хозяев возбудителя анаплазмоза крс Anaplasma marginale Theiler, 1910: автореф. дис…. канд. биол. наук / О.Ф. Гробов. – Москва, 1963. - 20 с.
9. Заблоцкий, В.Т. Основные итоги и перспективы научных исследований по разработке средств и методов диагностики, борьбы и профилактики протозойных болезней животных в России / В.Т. Заблоцкий // Вестник ветеринарии. - 1998. - №7. - С. 11 - 15.
10. Мальцева, О.Е. Анаплазмоз крс в Центральном регионе РФ (эпизоотология, вакцинопрофилактика, химиотерапия и меры борьбы): автореф. дис….канд. биол. наук / О.Е. Мальцева. – Москва, 2004. - 15 с.
11. Малофеева, Н.А. Анаплазмоз крупного рогатого скота и усовершенствование мер борьбы с ним в условиях Рязанской области: автореф. дис….канд. вет. наук./ Н.А. Малофеева. – Москва, 2007- 171 л.
12. Минасян, В.Г., Ткаченко, Ю.Г., Идина, М.Ф. Методы лечения коров больных анаплазмозом. / В.Г. Минасян, Ю.Г. Ткаченко, М.Ф. Идина // Ветеринарная патология – 2009 - №9 - С. 82-85.
13. Теплова, Е.И. Вспышка анаплазмоза крупного рогатого скота в стойловый период / Е. И. Теплова, Л. К. Лиховоз // Ветеринария. 1984.-№ 12. - С. 4041.
14. Anon, Preliminary observations on tick and tick-borne diseases in the north West province of Cameroon. // Rev. Elevage Med. veter., 1991; T. 3, P. 263-265
15. Anthony D. W. and Roby Т. О. In "Proceedings, 4th Natl. Anaplas. Res.
16. Kocan К. M. In “Morphology, Physiology and Behavioral Ecology of Ticks,” Sauer J. R., Hair J. A., eds. Chichester, England, Horwood, Inc., 1986. - P. 472-505.
17. Kocan K. M., de la Fuente J., Blouin E. F. et al. The natural history of Anaplasma marginale // Vet. Parasitol. – 2010. – Vol. 167. – P. 95–107.
18. Reinbold, J.B. Detection of Anaplasma marginale and A. phagocytophilum in bovine peripheral blood samples by duplex real-time reverse transcriptase PCR assay / J.B. Reinbold, J.F. Coetzee, K.R. Sirigireddy, R.R. Ganta // J. Clin. Microbiol. — 2010. — N. 48. — P. 2424–2432.

Test with Piro-stop to deal with anaplasmosis in cattle

I.E. Tarasov, E.N. Kanapelko

1. I.E. Tarasov, PhD, FGBNU ASRIVSHE, e-mail: i_tarasov1984@mail.ru, 123022, Moscow, Zvenigorodskoe road, 5, Tel/fax 8 (499) 256-35-81 2. E.N. Kanapelko, DVM, veterinary clinic "MiG" 8 (495) 181-30-94, e-mail: talalaka_ne@mail.ru, 129226, Moscow, Agricultural st, 16a, pp. 3

Summary: anaplasmosis is faunded in many regions of Russia, as well as in other countries of the world. The disease is recorded in the form of an acute course, including the associative form, as well as in the form of carrier in literature. For elimination anaplasmosis in cattle was tested imidokarb dipropionate 12% (Piro stop^®) of Nizhny Novgorod. Upon visual examination, 11 cows no clinical signs of acute anaplasmosis were found. The evaluation of morphological and biochemical indices of blood: in the individuals identified and a fair erythropenia hemoglobinemia combined with absolute and relative leiko- and monocytosis, indicating that the attenuation of the infectious process. Microscopy of stained blood smears revealed the presence of Anaplasma when parasitaemia level 1,45 ± 0,64%, to confirm the diagnosis used a combination of serologic IHA and ELISA, which resulted in all 11 cows were seropositive at a dilution of 1: 50 ... 1: 400. Further more infected controls (n = 2) of all drug treated animals were subjected to Pyro-stop^® at different doses: the first experimental group (n = 4) at the rate of 300 mg of the imidokarb per 100 kg b.w. once and experimental group 2 (n = 5) - 480 mg per 100 kg b. w. twice with an interval of 14 days. After 30 days, the level of parasitaemia in the experimental group 1 decreased to 0,90 ± 0,33% (to 37.93%) vs. 0,09 ± 0,11% (to 93.79%) in the second test group, which is consistent and the results of IHA and ELISA. The most sensitive method for diagnosis of anaplasmosis in the form of carriers are methods IHA and ELISA. To eliminate the carrier is an animal an effective dose or 4 ml (480 mg imidikarb) per 100 kg b. w. at double application.

Keywords: anaplasmosis, of cattle, carrier, imidokarb dipropionate, parasitaemia, laboratory diagnostic

Literature

1. Agaev, A.A. Anaplazmoz krupnogo rogatogo skota i mery bor'by s nim v Azerbajdzhanskoj SSR: avtoref. dis….d-ra.vet.nauk [Anaplasmosis in cattle and measures to combat it in the Azerbaijan SSR]/A.A. Agaev. – Moskva, 1971.- 43 p.
2. Bejsembaev, K.K. EHpizootologicheskie osobennosti anaplazmoza krupnogo rogatogo skota i sovershenstvovanie metodov ego diagnostiki, profilaktiki i lecheniya: dis….kand. vet. nauk[Epizootological features of anaplasmosis in cattle and improvement of its methods of diagnosis, prevention and treatment]/ K.K. Bejsembaev.- Omsk, 2005. – 140 p.
3. Bityukov, P.A. O terapevticheskoj ehffektivnosti terramicina pri anaplazmoze krupnogo rogatogo skota [About of therapeutic effectiveness of Terramycin with anaplasmosis in cattle]/P.A. Bityukov, P.M. Mordasov // Mater. nauch. konf. po problemam protozoologii. - Samarkand Tajlyak, 1963. – p. 28 - 29.
4. Vasilevich F. I., Belimenko V. V., Gulyukin M. I., Georgiu H. Prakticheskoe rukovodstvo po bor'be s kroveparazitarnymi boleznyami domashnih zhivotnyh [How to combat the blood parasite pet diseases]. – Moskva: ZooVetKniga, 2015. – 86 p.
5. Georgiu, X., Serologicheskie reakcii dlya diagnostiki anaplazmoza [Serological tests for the diagnosis of anaplasmosis] /X. Georgiu, N.I. Stepanova // Veterinariya.- 1987.- № 5.-p. 43-45.
6. Georgiu, X. Sravnitel'naya ocenka serologicheskih testov (RDSK, RIGA i IFA) dlya diagnostiki anaplazmoza rogatogo skota i nuttallioza loshadej: dis….d-ra biol. nauk [Comparative evaluation of serological tests (RDSK, Riga and ELISA) for the diagnosis of anaplasmosis of cattle and horses nuttalliosis]/ X. Georgiu.  – M., 1997. – 203 p.
7. Georgiu, H. Sovremennye laboratornye metody diagnostiki anaplazmoza krupnogo rogatogo skota i ovec [Modern laboratory methods of diagnosis of anaplasmosis in cattle and sheep]/ H. Georgiu, V.V. Belimenko // RVZH. SKHZH. – 2014. – № 3. – p. 31–32.
8. Grobov, O.F. EHksperimental'nye issledovaniya po vyyasneniyu vozmozhnogo kruga hozyaev vozbuditelya anaplazmoza krs Anaplasma marginale Theiler, 1910[Experimental studies to elucidate the possible range of causative agent of the owners of cattle anaplasmosis Anaplasma marginale Theiler, 1910]: avtoref. dis…. kand. biol. nauk / O.F. Grobov. – Moskva, 1963. - 20 p.
9. Zablockij, V.T. Osnovnye itogi i perspektivy nauchnyh issledovanij po razrabotke sredstv i metodov diagnostiki, bor'by i profilaktiki protozojnyh boleznej zhivotnyh v Rossii [The main results and prospects of research on the development of tools and methods for diagnosis, control and prevention of protozoal diseases in animals of Russia]/ V.T. Zablockij // Vestnik veterinarii. - 1998. - №7. - p. 11 - 15.
10. Mal'ceva, O.E. Anaplazmoz krs v Central'nom regione RF (ehpizootologiya, vakcinoprofilaktika, himioterapiya i mery bor'by) [Anaplasmosis of cattle in the Central region of Russia (epizootology, vaccine, chemotherapy and control measures)]: avtoref. dis….kand. biol. nauk / O.E. Mal'ceva. – Moskva, 2004. - 15 p.
11. Malofeeva, N.A. Anaplazmoz krupnogo rogatogo skota i usovershenstvovanie mer bor'by s nim v usloviyah Ryazanskoj oblasti [Anaplasmosis in cattle and improvement of measures of struggle against it in the conditions of the Ryazan region]: avtoref. dis….kand. vet. nauk./ N.A. Malofeeva. – Moskva, 2007- 171 p.
12. Minasyan, V.G., Tkachenko, YU.G., Idina, M.F. Metody lecheniya korov bol'nyh anaplazmozom. [Methods of treatment of cows sick anaplasmosis] / V.G. Minasyan, YU.G. Tkachenko, M.F. Idina // Veterinarnaya patologiya – 2009 - №9 - p. 82-85.
13. Teplova, E.I. Vspyshka anaplazmoza krupnogo rogatogo skota v stojlovyj period [The outbreak of anaplasmosis in cattle in the stall period] / E. I. Teplova, L. K. Lihovoz // Veterinariya. 1984.-№ 12. - p. 4041.
14. Anon, Preliminary observations on tick and tick-borne diseases in the north West province of Cameroon. // Rev. Elevage Med. veter., 1991; T. 3, P. 263-265
15. Anthony D. W. and Roby Т. О. In "Proceedings, 4th Natl. Anaplas. Res.
16. Kocan К. M. In “Morphology, Physiology and Behavioral Ecology of Ticks,” Sauer J. R., Hair J. A., eds. Chichester, England, Horwood, Inc., 1986. - P. 472-505.
17. Kocan K. M., de la Fuente J., Blouin E. F. et al. The natural history of Anaplasma marginale // Vet. Parasitol. – 2010. – Vol. 167. – P. 95–107.
18. Reinbold, J.B. Detection of Anaplasma marginale and A. phagocytophilum in bovine peripheral blood samples by duplex real-time reverse transcriptase PCR assay / J.B. Reinbold, J.F. Coetzee, K.R. Sirigireddy, R.R. Ganta // J. Clin. Microbiol. — 2010. — N. 48. — P. 2424–2432.

Статья опубликована в журнале «Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии», №1, 2017 г.